Шагина А.А.

ЗНАЧЕНИЕ ПОЛИМЕРАЗНО-ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ В ВЫЯВЛЕНИИ ПОЛИМОРФНЫХ ВАРИАНТОВ ГЕНОВ BRCA1 И BRCA2 В РАЗВИТИИ НАСЛЕДСТВЕННОЙ ФОРМЫ РАКА МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ

Рак молочной железы (РМЖ) является основной локализацией онкопатологии среди женского населения развитых стран. В среднем по стране в 1995 году прирост стандартизованного показателя заболеваемости отмечен на уровне 27,5% и достиг 45,8 на 100тыс. женского населения (Чиссов В.И., 1995), а к 2005 г. он увеличился до 60,0 на 100 тыс. Подобная тенденция сложилась в странах Евросоюза, где показатель заболеваемости РМЖ варьирует от 31 до 120 случаев на 100 тыс. женского населения (среднее значение 110,3 на 100 тыс.). Так, максимальная заболеваемость в Англии – 92, а в Нидерландах – 120 случаев на 100 тыс. женщин. Россия занимает 28-е место в Европейском реестре по заболеваемости РМЖ. Ежегодно в РФ у 50 тыс. женщин впервые устанавливается диагноз РМЖ, который лидирует среди всей женской онкологической патологии и составляет 19,3% (Мерабишвили В.М., 2008).

Пик заболеваемости РМЖ в настоящее время приходится на возраст 50 лет и старше (Семиглазов В.Ф., 1992).

Но даже среди «минимальных» форм РМЖ, по данным А.А. Орлова, у 30% пациенток выявляются метастатически пораженные лимфатические узлы, причем у 8,9% с инвазией кровеносных и лимфатических сосудов. По-прежнему в России 30–40% случаев, вновь диагностированных РМЖ выявляется в виде местно-распространенных или метастатических форм, что нехарактерно для соответствующих показателей в Евросоюзе, где они составляют не более 6%.

Несмотря на мощное развитие лекарственной терапии РМЖ, применение комплексных методов лечения, увеличить выживаемость пациенток моложе 50 лет удалось лишь на 20%, а старше 50 лет – только на 25% (Моисеенко В.М. и соавт., 1997).

Поэтому поиск новых методов диагностики и лечения РМЖ является крайне актуальным направлением в оказании помощи многочисленному контингенту женщин, страдающему раком молочной железы.

Цель работы – изучить частоту мутации гена BRCA-1 и 2 у пациенток с подтвержденным диагнозом рак молочной железы в сравнении со здоровой популяцией женщин Уральского региона методом полимеразной цепной реакции.

Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:

1. Используя метод полимеразной цепной реакции научиться определять мутации гена BRCA-1 и 2.

2. Изучить частоту встречаемости мутаций гена BRCA-1 и 2 у женщин в возрасте до 50 лет

3. Выявить BRCA-положительных женщин среди здоровой популяции и сформировать группу риска по развитию раку органов репродуктивной системы

4. Сопоставить удельный вес мутаций у пациенток с подтвержденным диагнозом РМЖ в сравнении со здоровой популяцией женщин

5. Изучить влияние мутантного гена BRCA-1 и 2 на течение рака молочной железы

Материалы и методы исследования

Материалом для исследования послужили случаи заболеваемости женщин РМЖ в общем объеме 20. В этот объем вошли: истории болезни пациенток с основным диагнозом РМЖ (pT1-4N0-3M0-1), находившихся на лечении в Свердловском областном онкологическом диспансере в период 2008-2010г. в возрасте 24 – 52 года.

Для изучения удельного веса мутаций BRCA-1 и 2 среди здорового контингента женщин основная группа пациенток была дополнена группой сравнения. В нее вошли здоровые женщины, паритетные по возрасту с основной группой.

Нами были сформированы I группа (основная, n=20). Пациентки имеющие мутацию гена BRCA-1 и 2 вошли в Iа подгруппу (n=5) и не имеющие мутации в Ib подгруппу (n=15). Группу сравнения (II) составили здоровые женщины, паритетные по возрасту.

Критерии включения пациенток в группы исследования:

- исследование генов BRCA-1 и 2 среди пациенток с диагнозом РМЖ и здоровой популяции женщин методом ПЦР;

- морфологическая верификация диагноза РМЖ по данным гистологического исследования;

- сведения о выживаемости пациенток (более 2 лет);

- наличие информированного согласия пациентки на проведение предложенного метода исследования.

Критерии разделения на подгруппы:

- наличие или отсутствие мутации гена BRCA-1 и 2 у пациенток с диагнозом рак молочной железы

Критерии исключения:

- возраст старше 50 лет

- отсутствие согласия пациенток на проведение исследования.

Все пациентки с диагнозом рак молочной железы были пролечены согласно рекомендациям Сан-Галлена 2009 г.

Исследование гена BRCA-1 и 2 проводилось в лаборатории генетических исследований ФГБУ НИИ ОММ Росмедтехнологий (Руководитель к.м.н. Третьякова Т.Б.) и лаборатории медицинского центра Гармония (Руководитель к.м.н. Ворошилина Е.С.).

Результаты и их обсуждение

У пациенток I группы с подтвержденным диагнозом рак молочной железы pT1-4dN0-3M0-1 изменение генов BRCA1 и 2 было следующим. Из 20 обследованных женщин у 5 была выявлена мутация гена BRCA1 в точке 185. При этом 1 пациентка являлась первично метастатической (метастазы в ткани передней брюшной стенки и легкие). У четырех заболевание являлась локализованным. Всем женщинам было проведено стандартное комплексное лечение, включающее хирургический компонент (мастэктомии по Маддену и Холстеду, подкожную мастэктомию и оп. Блохина), неоадьювантную и адьювантную полихимиотерапию, и дистанционную лучевую терапию в суммарной очаговой дозе 44 – 60Гр, а также адьювантная кастрация (хирургическим или лекарственным методом. За период наблюдения за Ia подгруппой нами было отмечено развитие метастатического процесса у 1 пациентки (метастазы в яичники и канцероматоз брюшины) и один случай летального исхода на первом году от момента постановки диагноза. Остальные три пациентки находятся в состоянии полной ремиссии без признаков местного рецидива и развития метастатического процесса. Таким образом в Ia подгруппе были достигнуты следующие результаты:

- 3-х безрецидивная выживаемость составила 60%,

- 3-х общая выживаемость составила 80%,

- метастатический процесс развился в 40%,

- летальность на первом году от момента постановки диагноза отмечена в 20% случаев.

Среди пациенток Ib подгруппы (n=15) показатели имели следующие значения:

- 3-х летняя общая выживаемость отмечена на уровне 100%,

- 3-х летняя безрецидивная выживаемость – 93,33% ,

- метастатический процесс развился в 6,67% случаев,

- летальность на первом году от момента постановки диагноза отмечена на уровне 0%.

При сравнении результатов лечения рака молочной железы у пациенток Ia и Ib подгрупп мы видим снижение показателей общей и безрецидивной выживаемости у женщин, имеющих мутации генов BRCA 1 и 2, а также рост годичной летальности и увеличение рисков развития метастатического процесса.

При анализе результатов ПЦР диагностики у здорового контингента женщин с целью определения мутаций генов BRCA 1 и 2 нами не было отмечено положительных реакций (у 40 обследованных женщин мутации не обнаружены).

Таким образом, сравнивая основную группу и группу сравнения мы пришли к следующему результату. В основной группе удельный вес мутаций генов BRCA1 и 2 составил 25%, что значительно выше чем в общей популяции женского населения не имеющего диагноз рак молочной железы (5%).

Мы считаем, что пациентки с диагнозом РМЖ должны дополнительно обследоваться на предмет мутаций указанных генов с целью дальнейшей коррекции лечения и возможного получения более значимых отдаленных результатов.

Выводы

1. В период проведения работы автор в составе коллектива лаборатории Генетики ФГБУ НИИ ОММ научился определять мутации гена BRCA-1 и 2 методом ПЦР диагностики.

2. При проведении исследования мы попытались определить частоту встречаемости мутаций генов BRCA1 и 2 у пациенток с подтвержденным диагнозом РМЖ (25%) и среди общей популяции женщин Уральского региона (0%).

3. В ходе исследования нам не удалось сформировать группу риска среди здоровой популяции женщин Уральского региона, т.к. мутации гена BRCA1 и 2 в группе сравнения отсутствовали.

4. При анализе удельного веса мутаций гена BRCA1 и 2 среди пациенток с диагнозом рак молочной железы и здоровой популяции женщин соотношение составило 25% к 0%.

5. Анализ отделенных результатов лечения РМЖ среди пациенток Ia подгруппы показал низкую общую и безрецидивную выживаемость. А также высокий уровень летальности на первом году от момента постановки диагноза и развития метастатического процесса.

Практические рекомендации

1. Определение мутаций генов BRCA1 и 2 желательно вводить в план обследования пациенток с диагнозом РМЖ, с целью коррекции тактики лечения.

2. При помощи ПЦР диагностики в определении мутаций генов BRCA 1 и 2 необходимо формировать группы риска по развитию рака молочной железы.

Список литературы

1. Баранов, В.С. Генетический паспорт – основа индивидуальной и предективной медицины [Текст] / В.С. Баранов. – СПб., 2009. – 470с.

2. Выбор оптимальной методики исследования гена BRCA1 и BRCA2[Текст] / А.А. Дмитриева, Е.С. Каретникова, О.С. Тихомирова, П.К. Яблонский // «Белые ночи Санкт-Петербурга» V международная ежегодная конференция «Проблемы диагностики и лечения рака молочной железы», - СПб., 2008. – С.43

3. Геном человека и гены «предрасположенности» : Введение в предиктивную медицину [Текст] / В.С. Баранов, Е.В. Баранова, Т.Э. Иващенко, М.В. Асеев. – СПб, 2000. – 280с.

4. Иванов, В.И. Геномика-медицине ИКЦ [Текст] / В.И.Иванов, Л.Л. Киселева – М., 2005. – 380с.

5. Кишкун, А.А. Гормональные и генетические исследования в клинической практике [Текст] / А.А. Кишкун. – М., 2007. – С.363-370

6. Клаг, У. Мир биологии и медицины [Текст] / У.Клаг, М. Каммингс. – М., 2007. – 700с.

7. Клинические и морфологические характеристики больных BRCA-положительным и BRCA-отрицательным раком молочной железы [Текст] / D.P. Atchley, C.T. Albarracin, A. Lopez, V. Valero, C.I. Amos, A.M. Gonzzalez-Angulo, G.N. Hortobagyi, B.K. Arun // Journal of Clinical Oncology, 2008. – Т. 2. – №4. – С.312 (36)

8. Клинические и морфологические характеристики больных BRCA-положительным и BRCA-отрицательным раком молочной железы [Текст] / Deann P.Atchley, C.T. Albarracin, A. Lopez at all // Journal of Clinical Oncology. 2008. – Т.2. – №4. – С.312-318

9. Мерабишвили, В.М. Рак молочной железы в России и Санкт-Петербурге. Состояние ранней диагностики. Заболеваемость. Выживаемость [Текст] / В.М. Мерабишвили // «Белые ночи Санкт-Петербурга» V международная ежегодная конференция «Проблемы диагностики и лечения рака молочной железы». – СПб., 2008. – С.28

10. Основы медицинской и клинической генетики [Текст] / А.Ю. Савченко, А.С. Рождественский, Е.Ф. Литвинович, Н.С. Захарова, А.А. Шестерикова. – Ростов-на-Дону, 2008. – 350с.

11. Ребикова, Д.В. ПЦР «в реальном времени» [Текст] / Д.В. Ребикова. – М., 2009. – 120с.

12. Шевченко, В.А. Генетика человека [Текст / В.А. Шевченко, Н.А. Топорнина, Н.С. Стволинская. – М., 2002. – 250с.